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平行反應監(jiān)測技術(PRM) :

PRM是一種基于高分辨、高精度質譜的離子監(jiān)視技術，能夠對目標蛋白質、目標肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測，從而實現對目標蛋白質/肽段進行定量。PRM技術基于Q-Orbitrap為代表的高分辨、高精度質譜平臺，首先

利用四級桿質量分析器的選擇能力，用Q1選擇目標肽段的母離子,隨后在Collision cell中對母離子進行碎裂，后利用Orbitrap分析器在二級質譜中檢測所選擇的母離子窗口內的所有碎片信息。這樣即可對復雜樣本中的目標蛋白質/肽段進行準確地特異性分析。

實驗意義:

PRM技術是針對無抗體蛋白的驗證新技術，用于label free, iTRAQ, TMT, SILAC等相對定量蛋白質組數據的驗證，或對復雜樣本中的目標蛋白質進行靶向定量分析。

實驗步驟:

用PRM進行蛋白質組數據驗證的一般步驟為:

結果展示

實驗完成周期及交付標準:

1.實驗周期: --般PRM時間為: 5-10天

2.交付標準:

組學驗證:

①主要儀器、試劑和實驗方法。

②PRM目標離子信息:肽段序列和定量子離子。

③方法學重復性評價:三次技術重復的色譜峰面積相對標準偏差(RSD) (預實驗結果) 。

④實驗結果:二級圖譜，XIC圖譜,原始峰面積強度值，矯正后的相對表達量，兩組樣本間的相對比值，ttest p值。

相對/定量:

①主要儀器、試劑和實驗方法。

②PRM目標離子信息:肽段序列和定量子離子。

③方法學評價:相對定量的重復性評價-測試樣本的三次技術重復的色譜峰面積相對標準偏差(RSD) (預實驗結果) ;

定量的方法學評價-標準品XIC圖譜，LOD， LOQ,線性范圍， 6個稀釋梯度得到的標準曲線及線性公式(每個稀釋度有3次技術重復)。

④實驗結果:

相對定量:二級圖譜，XIC圖譜,原始峰面積強度值，矯正后的相對表達量，兩組樣本間的相對比值，ttest p值。

定量:二級圖譜，XIC圖譜,原始峰面積強度值，根據標準曲線計算得到的蛋白質濃度值，兩組樣本間的相對比值，ttest p值。

需確認的信息:

1.樣品:

①如果樣品為蛋白質溶液，蛋白質總量≥300mg;

②如果是組織樣品，樣品總量≥0.1g;如果是細胞樣品，細胞數量≥107個;

③如果是體液樣品，血清≥200ml，腦脊液≥200ml, 尿液≥1ml,淚液≥1ml。

2.樣品采集過程中使用到塑料制品時，盡量使用無色進口產品，以減少塑料制品中雜質對質譜檢測的影響。

文獻參考

[1] Navin Rauniyar. Parallel Reaction Monitoring: A Targeted Experiment Performed Using High Resolution and HighMass Accuracy Mass Spectrometry. IntJ Mol Sci. 2015 Dec; 16(12): 28566- -28581.

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