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細(xì)菌RNA提取試劑盒(DNase I)說明書
點擊次數(shù):3076 更新時間:2020-07-06

 

細(xì)菌RNA提取試劑盒(DNase I)說明書

                                                                                           

RNApure Bacteria Kit(DNase I)

細(xì)菌RNA提取試劑盒(DNase I)

 

Cat. No.   K0539

保存:DNase I、10×Reaction Buffer:-20℃

其它組分:室  溫

 

組分說明

 

                                              Cat. No.              K0539

                                              Kit Size                 50

                                              DNase I                1000 U

                                        10×Reaction Buffer           1000  μl

                                             Buffer RL               35 ml

                                            Buffer RW1               40 ml

                                    Buffer RW2(concentrate)          11 ml

                                        RNase-Free Water             10 ml

                                      Shredder Spin column             50

                                         Spin Column RM                50

                                    Collection Tube(1.5 ml)            50

                                     Collection Tube(2 ml)            100

 

產(chǎn)品簡介

 

    本試劑盒采用高效、專一結(jié)合核酸的離心吸附柱和*的緩沖系統(tǒng),可從細(xì)菌或培養(yǎng)的動物細(xì)胞中快速提取總 RNA。

30-40 分鐘內(nèi)即可完成反應(yīng),提取的總 RNA 純度*,沒有蛋白質(zhì)和其他污染,適用于 RT-PCR、Real-Time RT-PCR、

芯片分析、體外翻譯等實驗。

 

注意事項

 

1.  預(yù)防RNase污染,應(yīng)注意以下幾方面:

1)使用無RNase的塑料制品和槍頭,避免交叉污染。

 

2)玻璃器皿應(yīng)在使用前于180℃高溫下干烤4小時,塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分鐘,用水*沖洗后高壓滅菌。

3)配制溶液應(yīng)使用無RNase的水。

 

4)操作人員戴一次性kouzhao和手套,實驗過程中要勤換手套。

2.  Buffer  RL 在使用前請加入β-巰基乙醇至終濃度為 1%,如 1 ml Buffer  RL 加 10 μl  β-巰基乙醇。加入β-巰基乙醇的

 

Buffer RL 4℃可保存 1 個月,如出現(xiàn)沉淀,請加熱溶解后使用。

3.  第-次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明先在 Buffer RW2 中加入無水乙醇。

5.  如未特殊說明,所有離心步驟均在室溫下進行,且所有操作步驟動作要迅速。

 

自備試劑:Lysozyme(YJ0887)、β-巰基乙醇、無水乙醇(新開封或提取RNA)  

 

 

操作步驟

 

 1.   4℃  10,000 rpm(~13,400×g)離心2分鐘收集菌體(菌體量大不超過1×109 ),小心去除所有上清。

                                                                                

     注意:上清如果有殘留,會影響后續(xù)的消化過程。

 

 2.   用含有Lysozyme的100  μl TE緩沖液*重懸菌體,室溫孵育。具體配方和孵育時間如下:

 

TE 緩沖液中 Lysozyme 的終濃度                孵育時間

 

G 細(xì)菌                  400  μg/ml                 3-5 分鐘

                          -

G+ 細(xì)菌                 3 mg/ml                   5-10 分鐘

 3.   加入350  μl裂解液RL(使用前請檢查是否加入β-巰基乙醇),渦旋震蕩混勻(此步驟可能出現(xiàn)不溶性沉淀),將溶液與沉淀全部加入到已裝入收集管(Collection Tube 2 ml)的過濾柱(Shredder Spin Column)中,10,000 rpm離心 2分鐘。

 4.   向上步得到的濾液中加入250  μl無水乙醇,混勻(此時可能會出現(xiàn)沉淀)。將得到的溶液和沉淀一起轉(zhuǎn)入吸附柱(Spin Column RM)中(吸附柱已裝入2 ml收集管中),10,000 rpm離心1分鐘,棄掉廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

 5.   向吸附柱中加入350  μl Buffer RW1,10,000 rpm離心1分鐘,棄廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

 6.   配制DNase I  混合液:取52 μl RNase-Free Water,向其中加入8  μl 10×Reaction Buffer 和20  μl DNase I(1U/μl),混勻,  配制成終體積為80 μl的反應(yīng)液。

 7.   向吸附柱中直接加入80 µl DNase I  混合液,20-30℃孵育15分鐘。

 8.   向吸附柱中加入350  μl Buffer RW1,10,000 rpm離心1分鐘,棄廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

 9.   向吸附柱中加入500  μl Buffer RW2(使用前檢查是否加入無水乙醇), 10,000 rpm離心1分鐘,棄廢液。

 10. 重復(fù)步驟9。

 11. 將吸附柱放回收集管中,10,000 rpm離心2分鐘。

     注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余乙醇去除,乙醇?xì)埩魰绊懞罄m(xù)的酶促反應(yīng)(酶切、PCR等)。

 12. 將吸附柱裝入新的RNase-Free的1.5 ml  收集管中,向吸附膜的中間加入30-50 μl RNase-Free Water,室溫放置1分鐘,10,000 rpm離心1分鐘,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。

注意:1)  RNase-Free Water 體積不應(yīng)小于 30 μl,體積過小影響回收率。

2)  如果要提高RNA的產(chǎn)量,可用30-50 μl新的RNase-Free Water重復(fù)步驟12。

3)  如果要提高RNA濃度,可將得到的溶液重新加入到吸附柱中,重復(fù)步驟12。

 

 

實驗代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費代檢測

CCK8檢測

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

 

免疫組化

熒光定量PCR

動物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測

細(xì)胞增殖

激光共聚焦

DNA甲基化實驗

細(xì)胞劃痕

鈣離子濃度檢測

掃描電鏡實驗

microRNA 測序

動物實驗

Taqman探針

ATP/ADP檢測

 

石蠟/冰凍切片

定點突變

線粒體膜電位(MMP)檢測

細(xì)胞生長曲線的測定

藥理毒理動物實驗

 

免疫共沉淀

真核表達(dá)載體構(gòu)建

染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

非標(biāo)定量(Label-free)實驗

滬公網(wǎng)安備 31011802001678號

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