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聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)酶聯(lián)免疫吸附分析法(PCR-ELISA)
聚合鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction,簡(jiǎn)稱PCR),是用于放大特定的DNA片段,在生物體外復(fù)制DNA的分子生物學(xué)技術(shù).ELISA是免疫學(xué)測(cè)定中敏感和特異的檢測(cè)方法的代表.PCR-ELISA綜合上述兩方法,成為繼PCR之后靈敏性更高,特異性更強(qiáng),更省時(shí)易行的新檢測(cè)方法,并且解決了PCR產(chǎn)物宣的問(wèn)題,使得PCR在臨床醫(yī)學(xué)上得以應(yīng)用.
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)增加的.PCR能將pg=10-⒓g量級(jí)的DNA起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-⒍g)水平,能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢測(cè)出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)空斑形成單位(Plaque form-ing unit,簡(jiǎn)稱PFU);在細(xì)菌的檢測(cè)中,即使低至1個(gè)細(xì)菌的靶DNA也能被檢出.PCR是分子生物學(xué)中檢測(cè)DNA普遍和靈敏的技術(shù).PCR反應(yīng)擴(kuò)增出相關(guān)DNA高拷貝數(shù),以前用熒光素(溴化乙錠,簡(jiǎn)稱EB)染色凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè),但無(wú)法定量.曾有人利用熒光素染色凝膠電泳的掃描照片進(jìn)行光密度分析,希望通過(guò)光密度的變化實(shí)現(xiàn)PCR的定量,但由于熒光素染色凝膠電泳本身的檢測(cè)結(jié)果不具有特異性,因此光密度分析無(wú)法獲得定量的結(jié)果,這使得長(zhǎng)期以為,PCR只能獲得相對(duì)定量的結(jié)果,無(wú)法應(yīng)用在臨床醫(yī)學(xué)上.科技的發(fā)展是相互影響的,酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)的出現(xiàn)啟發(fā)了人們,為PCR的定量開(kāi)辟了一條新的思路.在PCR擴(kuò)增以后,利用ELISA的原理和方法,使用酶標(biāo)抗體,通過(guò)免疫吸附,酶促反應(yīng)產(chǎn)物的分析來(lái)實(shí)現(xiàn)定量,這樣的新方法被稱為PCR-ELISA.
